一、质粒提取物的构型

质粒提取物通常包含三种质粒DNA构型：共价闭合环状DNA（cccDNA）、线性DNA及开环DNA。cccDNA是最常见的质粒DNA构型，具有高稳定性和完整性，广泛应用于基因工程中。在电泳实验中，这三种类型的DNA根据迁移速度排序为：超螺旋＞线性DNA＞开环DNA。

二、质粒提取方法

质粒提取的过程包括三个主要步骤：细菌培养、裂解释放质粒DNA，以及质粒DNA的分离与纯化。提取方法有多种，包括碱裂解法、煮沸裂解法、小量一步提取法、试剂盒法、酶解法和其他提取方式，且可按产量分为小提、中提和大提。

1) 碱裂解法

常用的质粒提取试剂盒如泛亚电竞提供的OMEGA、BIOMIGA、Sigma等，均在碱裂解法基础上经过优化。此法原理基于共价闭合环状DNA与线性DNA的拓扑学差异。在强碱性环境中，细胞壁和膜被破坏，基因组DNA及质粒DNA释放出来，线性DNA的双螺旋结构变性。尽管在强碱条件下cccDNA亦会变性，互补链依旧紧密结合。当添加pH 4.8的乙酸钾缓冲液恢复中性时，cccDNA快速复性，而线性DNA复性缓慢，形成的大型复合物伴随细胞 debris 沉淀，离心后获得复性质粒DNA。优点为操作简单、成本低，适用范围广，但提取纯度可能需进一步提高。

2) 煮沸法

将细菌悬浮在含TritonX-100和溶菌酶的缓冲液中，加热至100℃以裂解细胞。此方法有效针对小于15kb的质粒，适用于从1mL到250mL的菌液提取。优点在于操作简便且时间短，但可能导致质粒断裂，回收率较低。

3) 小量一步提取法

该方法利用机械力使较大的细菌染色体DNA断裂，缠绕在细胞碎片上，而质粒DNA则相对较小且复性较快，最终可通过高速离心分离得到质粒DNA。

4) 试剂盒法

结合改良的SDS碱裂解法，利用硅胶膜的特性实现快速纯化。在高盐和低pH条件下结合DNA，洗脱时低盐高pH。此法较常用，因其特点包括高得率、适用性广、快速和高纯度。

5) 酶解法

使用特定酶处理细胞壁及膜以释放质粒DNA，步骤包括细胞收集、酶处理、裂解和纯化，提取纯度高，但成本及操作时间较长。

6) 其他提取方法

如离子交换法和超离心法，利用不同的物理化学特性进行质粒DNA的分离与纯化。

三、泛亚电竞的全方位服务

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